嗜水氣單胞菌AH1在TSB培養(yǎng)基中的生長曲線測(cè)定結(jié)果
本文測(cè)定了嗜水氣單胞菌AH1在TSB培養(yǎng)基中的生長曲線進(jìn)行研究，結(jié)果表明，該菌屬于一種生存能力較強(qiáng)的細(xì)菌，前期不易死亡，后期死亡較快。
測(cè)定與研究
嗜水氣單胞菌AH1的生長曲線
嗜水氣單胞菌AH1在TSB培養(yǎng)基中培養(yǎng)時(shí)，該菌落總數(shù)及0D600值隨時(shí)間變化曲線如圖1所示。從圖中可以看出，種子液接種后前4h嗜水氣單胞菌的菌落總數(shù)對(duì)數(shù)值相對(duì)較低，處于延滯期；4h之后菌落總數(shù)開始迅速上升，進(jìn)入對(duì)數(shù)生長期，培養(yǎng)18h左右，培養(yǎng)基中的活菌落總數(shù)的對(duì)數(shù)值上升至最高峰達(dá)到7.3；19h至28h，嗜水氣單胞菌的菌落總數(shù)開始逐漸穩(wěn)定，為穩(wěn)定期；28h開始嗜水氣單胞菌AH1菌落總數(shù)對(duì)數(shù)值略為下降，進(jìn)入衰亡期。該菌的OD600值在4h之后開始顯著地上升，這個(gè)上升期一直持續(xù)到19-20h，并在20h附近OD600達(dá)到最高峰1.8，而在30h后OD值又開始小幅下降。以上分析可得：嗜水氣單胞菌AH1在TSB培養(yǎng)基中培養(yǎng)時(shí)，0-4h屬于延滯期，期間細(xì)胞數(shù)目沒有顯著的增加，OD600的數(shù)值也幾乎為零；從4h起至18h，細(xì)菌處于對(duì)數(shù)生長期，菌體以幾何數(shù)增加，增長速度快，期間OD600迅速上升；19-28h是穩(wěn)定期；第28h后進(jìn)入衰亡期，此時(shí)OD600略有下降。
圖1菌落總數(shù)及吸光值（OD600）與時(shí)間的關(guān)系圖
嗜水氣單胞菌AH1生長過程中OD600與活菌數(shù)的關(guān)系
挑取單菌落接種于28℃的固體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，一定時(shí)間后用TSB洗下菌苔，稀釋成不同的OD值，測(cè)其活菌數(shù)；如圖2所示為嗜水氣單胞菌在TSB中的活菌數(shù)與OD值的關(guān)系，從圖中可以看出，當(dāng)OD600值小于1時(shí)，OD600值與其活菌數(shù)呈現(xiàn)出良好的線性關(guān)系（y=17.081x-0.226）,因此當(dāng)OD600值小于1時(shí)，可以準(zhǔn)確地從表中讀出相對(duì)應(yīng)的活菌數(shù)。
嗜水氣單胞菌AH1生長過程中pH值的變化
嗜水氣單胞菌AH1在TSB培養(yǎng)基中培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)基的pH值隨培養(yǎng)時(shí)間的變化規(guī)律如圖3所示，由圖3的曲線可以看出，該菌在培養(yǎng)過程中產(chǎn)酸能力較強(qiáng)，在培養(yǎng)過程中培養(yǎng)基的pH值下降得非常快，培養(yǎng)時(shí)間為18h左右時(shí)，培養(yǎng)基的pH值降至最低，此時(shí)pH僅為6.3左右；培養(yǎng)時(shí)間在18-30h之間，培養(yǎng)基的pH趨于穩(wěn)定；30h后，培養(yǎng)液的pH值略微上升并穩(wěn)定在6.6。
嗜水氣單胞菌AH1在不同溶液中的生存時(shí)間的測(cè)定
嗜水氣單胞菌AH1分別保存于生理鹽水、PBS和TSB培養(yǎng)基中，置4℃條件下，間隔24h測(cè)定不同溶液中的細(xì)菌的活菌數(shù)，其結(jié)果如圖4所示。由圖4可看出，嗜水氣單胞菌AH1是一種生存能力較強(qiáng)的細(xì)菌，不管是在生理鹽水、PBS溶液還是TSB培養(yǎng)基中，前期都不容易死亡，后期則死亡較快。表明該菌抗逆性較強(qiáng)，給致病性的嗜水氣單胞菌的殺滅帶來了一定的難度。
圖2嗜水氣單胞菌AH1在生長過程中OD600值與活菌數(shù)的關(guān)系
圖3 pH值隨時(shí)間變化
圖4嗜水氣單胞菌AH1在不同溶液中的生存時(shí)間
結(jié)論
（1）嗜水氣單胞菌AH1在TSB培養(yǎng)基中培養(yǎng)時(shí)，0-4h屬于延滯期，期間細(xì)胞數(shù)目沒有顯著的增加，OD600的數(shù)值也幾乎為零；從4h起至18h，細(xì)菌處于對(duì)數(shù)生長期，菌體以幾何數(shù)增加，增長速度快，期間OD600迅速上升；19-28h是穩(wěn)定期；第28h后進(jìn)入衰亡期，此時(shí)OD600略有下降。
（2）在OD600值小于1.0的情況下，嗜水氣單胞菌AH1的OD600值與活菌數(shù)之間滿足線性關(guān)系y=17.081x-0.226，當(dāng)OD600值小于1時(shí)，可以準(zhǔn)確地從圖中讀出相對(duì)應(yīng)的活菌數(shù)。
（3）嗜水氣單胞菌AH1的產(chǎn)酸能力較強(qiáng)，當(dāng)培養(yǎng)進(jìn)行了18h后培養(yǎng)基的pH值便會(huì)降至最低點(diǎn)6.3，當(dāng)培養(yǎng)進(jìn)行了30h之后，培養(yǎng)基的pH值會(huì)逐漸上升并穩(wěn)定在6.6。嗜水氣單胞菌AH1的這一特點(diǎn)，可以為今后該病原菌的生理鑒定提供一定的參考與借鑒。
（4）嗜水氣單胞菌AH1是一種抗逆性比較強(qiáng)的細(xì)菌，若用生理鹽水、PBS或者TSB培養(yǎng)基培養(yǎng)該菌，其前期活菌數(shù)均不會(huì)發(fā)生明顯變化，后期則死亡較快。這表明該菌屬于一種生存能力較強(qiáng)的細(xì)菌，這給致病性的嗜水氣單胞菌的殺滅帶來了一定的難度。
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