金黃色葡萄球菌生長(zhǎng)曲線的測(cè)定步驟
葡萄球菌是可以在多個(gè)平面上分裂，并形成不規(guī)則簇的球形革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌。它們存在于所有溫血?jiǎng)游锏纳虾粑篮推渌掀け砻?。?0個(gè)葡萄球菌種中，具有獸醫(yī)學(xué)意義的約有4種：金黃色葡萄球菌、中間葡萄球菌、豬葡萄球菌和施氏葡萄球菌凝結(jié)亞種。
金黃色葡萄球菌是一種常見(jiàn)的人和幾種動(dòng)物的化膿性微生物；中間葡萄球菌是一種狗的主要化膿性細(xì)菌；已在幾個(gè)物種發(fā)現(xiàn)了豬葡萄球菌，引起豬滲出性上皮炎，有時(shí)引起牛的乳腺炎；施氏葡萄球菌凝血亞種（和中間葡萄球菌），有時(shí)與狗的外耳炎相關(guān)。下面一起來(lái)了解下金黃色葡萄球菌是如何分離出來(lái)的。
金黃色葡萄球菌生長(zhǎng)曲線的測(cè)定：
將-80℃保存的金黃色葡萄球菌甘油凍存液，按1︰100的比例接種到5mL胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基中，37℃、200rpm/min條件下培養(yǎng)至菌液OD600值為0.6左右。
配制兩瓶100mL無(wú)菌的胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基，按1︰100的比例將OD600值為0.6左右的種子菌液接種到100mL無(wú)菌的胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基，其中一瓶不接種，作為陰性對(duì)照組。
于37℃、200rpm/min的恒溫?fù)u床中培養(yǎng)，分別于培養(yǎng)的0、1.5、3、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24h取出1mL菌液，在96孔板中每孔加入200μL菌液，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)設(shè)置3個(gè)復(fù)孔，在酶標(biāo)儀中檢測(cè)OD600值，制作金黃色葡萄球菌的生長(zhǎng)曲線。選取金黃色葡萄球菌處在穩(wěn)定生長(zhǎng)期的初期階段，進(jìn)行金黃色葡萄球菌來(lái)源OMVs的分離純化。
金黃色葡萄球菌來(lái)源OMVs的分離純化：
按1︰100的比例，將100μL金黃色葡萄球菌甘油凍存液無(wú)菌接種到10mL無(wú)菌胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基中，于37℃、200rpm/min條件下培養(yǎng)至菌液OD600值為0.6左右。將上述250μL金黃色葡萄球菌種子液無(wú)菌接種到含250mL含胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基的1L培養(yǎng)瓶中(兩瓶)，于37℃、200rpm/min的恒溫?fù)u床中培養(yǎng)至穩(wěn)定生長(zhǎng)期的初期階段。收集處于穩(wěn)定生長(zhǎng)期初期階段的金黃色葡萄球菌培養(yǎng)液500mL，在4℃，15000g條件下離心20min去除細(xì)菌后取上清液，過(guò)0.45μm濾膜去除雜質(zhì)后收集上清液，上清液過(guò)0.22μm濾膜后收集上清，將上清經(jīng)100kD濾膜進(jìn)行超濾處理，去除蛋白質(zhì)等大分子雜質(zhì)，用200μL無(wú)菌PBS溶液溶解沉淀物，得到金黃色葡萄球菌來(lái)源OMVs的濃縮液。
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